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除了重新提取樣本和調(diào)整上樣/檢測(cè)參數(shù)外，還有2種針對(duì)輕度到中度降解的補(bǔ)救方案，適合無(wú)法重新取材的場(chǎng)景：

1. 靶標(biāo)蛋白重新富集法

如果樣本還有部分完整ACA11，可以通過(guò)?WesternBlot膜片段回收法?富集完整靶標(biāo)：

先對(duì)降解樣本進(jìn)行常規(guī)電泳分離，轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色標(biāo)記分子量區(qū)間；

切下100~120kDa區(qū)間的PVDF膜，用洗脫液（glycine 0.1M + 1% SDS，pH 2.2）將蛋白從膜上洗脫下來(lái)；

用丙酮沉淀回收蛋白，重新進(jìn)行電泳轉(zhuǎn)膜檢測(cè)，富集后的完整ACA11濃度提升，更容易檢出信號(hào)。

這種方法適合原有樣本量少、無(wú)法重新取材的情況，能提升2-3倍完整靶標(biāo)的檢出率。

2. 蛋白酶抑制劑復(fù)性處理法

如果降解是因?yàn)閮鋈谶^(guò)程中蛋白酶激活導(dǎo)致，可以在樣本中補(bǔ)加蛋白酶抑制劑后低溫靜置復(fù)性：

向降解樣本中補(bǔ)加1×蛋白酶抑制劑混合物，輕輕混勻避免起泡；

4℃靜置孵育2~4小時(shí)，抑制殘余蛋白酶活性，終止繼續(xù)降解；

調(diào)整蛋白濃度后，增加50%上樣量重新檢測(cè)，同時(shí)配合超敏ECL發(fā)光，可檢出殘留的完整ACA11。

?? 注意：這兩種方法僅適用于?輕度-中度降解?（仍有部分完整蛋白殘留），如果是重度降解（內(nèi)參彌散/無(wú)條帶），即使富集也無(wú)法得到有效靶標(biāo)，還是必須重新提取樣本。