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除了重新提取樣本和調(diào)整上樣/檢測參數(shù)外，還有2種針對輕度到中度降解的補救方案，適合無法重新取材的場景：

1. 靶標蛋白重新富集法

如果樣本還有部分完整ACA11，可以通過?WesternBlot膜片段回收法?富集完整靶標：

先對降解樣本進行常規(guī)電泳分離，轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色標記分子量區(qū)間；

切下100~120kDa區(qū)間的PVDF膜，用洗脫液（glycine 0.1M + 1% SDS，pH 2.2）將蛋白從膜上洗脫下來；

用丙酮沉淀回收蛋白，重新進行電泳轉(zhuǎn)膜檢測，富集后的完整ACA11濃度提升，更容易檢出信號。

這種方法適合原有樣本量少、無法重新取材的情況，能提升2-3倍完整靶標的檢出率。

2. 蛋白酶抑制劑復(fù)性處理法

如果降解是因為凍融過程中蛋白酶激活導(dǎo)致，可以在樣本中補加蛋白酶抑制劑后低溫靜置復(fù)性：

向降解樣本中補加1×蛋白酶抑制劑混合物，輕輕混勻避免起泡；

4℃靜置孵育2~4小時，抑制殘余蛋白酶活性，終止繼續(xù)降解；

調(diào)整蛋白濃度后，增加50%上樣量重新檢測，同時配合超敏ECL發(fā)光，可檢出殘留的完整ACA11。

?? 注意：這兩種方法僅適用于?輕度-中度降解?（仍有部分完整蛋白殘留），如果是重度降解（內(nèi)參彌散/無條帶），即使富集也無法得到有效靶標，還是必須重新提取樣本。